Diese bissige und zum Brüllen komische Zeichentrickserie für Erwachsene verfolgt, wie Harley Quinn (gesprochen von Produktionsleiterin Kaley Cuoco) nach ihrem Bruch mit dem Joker (Alan Tudyk) ihre eigenen Wege geht. Mit Hilfe von Poison Ivy (Lake Bell) und einem bunt zusammengewürfelten Team von gescheiterten DC-Schurken versucht Harley, in die Legion of Doom aufgenommen zu werden, bevor sie durch eine Identitätskrise zu einer längeren Suche nach ihrem wirklichen Platz in Gotham City veranlasst wird. Harley Quinn bietet die bekanntesten DC-Charaktere und bedeutende Synchronstimmen auf – wie Christopher Meloni, Ron Funches, JB Smoove, Tony Hale u. a. – um den mörderischen Weg der titelgebenden Antiheldin von der Freundin zur Hauptdarstellerin zu zeigen.